ELISA-Technik
Fachinformation
Der ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) ist ein vielseitiges immunologisches Nachweisverfahren, das vor allem in medizinischen und biochemischen Laboren zur Identifikation und Quantifizierung von Molekülen wie Antikörpern, Antigenen, Viren, Bakterien oder Hormonen eingesetzt wird. Das Prinzip beruht auf der spezifischen Bindung von Antikörpern an Antigene und der anschließenden Darstellung durch eine enzymgekoppelte Farbreaktion. Dies erlaubt eine präzise Auswertung über Farbintensität im Spektralfotometer.
Die Technik eignet sich zum Nachweis verschiedenster Substanzen in Körperflüssigkeiten, Zelllysaten oder Lebensmittelproben. Typische Einsatzgebiete sind die Diagnose von Infektionen (z. B. HIV, SARS-CoV2), die Bestimmung von Hormonwerten oder Tumormarkern sowie Lebensmittelkontrollen auf Allergene wie Gluten.
Im Labor sind vier grundlegende ELISA-Formate gebräuchlich:
• Der direkte ELISA nutzt einen enzymgekoppelten Nachweisantikörper zur Identifizierung des Zielantigens. Die Methode ist kostengünstig und schnell, jedoch weniger sensitiv.
• Im indirekten ELISA wird nach der Bindung eines Primärantikörpers ein enzymgekoppelter Sekundärantikörper hinzugefügt, um die Nachweisstärke zu erhöhen.
• Beim Sandwich-ELISA binden zwei verschiedene Antikörper das Antigen von beiden Seiten ('Sandwich'). Dieses hochsensitive Verfahren ist ideal zum Nachweis geringer Antigenmengen.
• Im kompetitiven ELISA konkurrieren Probe-Antigen und ein standardisiertes Antigen um Antikörper-Bindungsstellen; die Farbreaktion ist invers zur Antigenmenge in der Probe.
Die Durchführung umfasst folgende Schritte: Beschichtung einer Mikrotiterplatte mit Antigen oder Antikörper, Blockierung nicht-spezifischer Bindungsstellen, Zugabe der Probe und Inkubation, Waschschritte zur Entfernung ungebundener Stoffe, Zugabe des spezifischen (primären und/oder sekundären) Antikörpers und abschließend die Farbreaktion nach Zugabe eines Substrats (z. B. TMB für HRP-Enzyme). Die Farbintensität korreliert mit der Konzentration des nachgewiesenen Moleküls.
Ein Vorteil der ELISA-Technik ist ihre hohe Spezifität und Sensitivität – allerdings erfordert der Test eine präzise Pipettiertechnik und strikte Einhaltung der Protokollschritte, da Fehler zu falsch-positive oder falsch-negative Ergebnissen führen können. Die Interpretation der Resultate muss stets im medizinischen Kontext erfolgen.
Die Technik eignet sich zum Nachweis verschiedenster Substanzen in Körperflüssigkeiten, Zelllysaten oder Lebensmittelproben. Typische Einsatzgebiete sind die Diagnose von Infektionen (z. B. HIV, SARS-CoV2), die Bestimmung von Hormonwerten oder Tumormarkern sowie Lebensmittelkontrollen auf Allergene wie Gluten.
Im Labor sind vier grundlegende ELISA-Formate gebräuchlich:
• Der direkte ELISA nutzt einen enzymgekoppelten Nachweisantikörper zur Identifizierung des Zielantigens. Die Methode ist kostengünstig und schnell, jedoch weniger sensitiv.
• Im indirekten ELISA wird nach der Bindung eines Primärantikörpers ein enzymgekoppelter Sekundärantikörper hinzugefügt, um die Nachweisstärke zu erhöhen.
• Beim Sandwich-ELISA binden zwei verschiedene Antikörper das Antigen von beiden Seiten ('Sandwich'). Dieses hochsensitive Verfahren ist ideal zum Nachweis geringer Antigenmengen.
• Im kompetitiven ELISA konkurrieren Probe-Antigen und ein standardisiertes Antigen um Antikörper-Bindungsstellen; die Farbreaktion ist invers zur Antigenmenge in der Probe.
Die Durchführung umfasst folgende Schritte: Beschichtung einer Mikrotiterplatte mit Antigen oder Antikörper, Blockierung nicht-spezifischer Bindungsstellen, Zugabe der Probe und Inkubation, Waschschritte zur Entfernung ungebundener Stoffe, Zugabe des spezifischen (primären und/oder sekundären) Antikörpers und abschließend die Farbreaktion nach Zugabe eines Substrats (z. B. TMB für HRP-Enzyme). Die Farbintensität korreliert mit der Konzentration des nachgewiesenen Moleküls.
Ein Vorteil der ELISA-Technik ist ihre hohe Spezifität und Sensitivität – allerdings erfordert der Test eine präzise Pipettiertechnik und strikte Einhaltung der Protokollschritte, da Fehler zu falsch-positive oder falsch-negative Ergebnissen führen können. Die Interpretation der Resultate muss stets im medizinischen Kontext erfolgen.
Kernpunkte
- ELISA basiert auf Antigen-Antikörper-Bindung und enzymatischer Farbreaktion
- 4 Haupttypen: Direkt, Indirekt, Sandwich, Kompetitiv
- Sandwich-ELISA bietet höchste Sensitivität
- Anwendung: Infektionsdiagnostik, Hormonbestimmung, Allergennachweis
- Kritische Faktoren: Präzise Pipettierung, Protokolltreue, klinische Interpretation
🧠 Wissenstest
Testen Sie Ihr Verständnis mit diesen Fragen:
1. Welche ELISA-Variante bietet die höchste Sensitivität?
✅ Erklärung: Der Sandwich-ELISA nutzt zwei spezifische Antikörper, die das Antigen von beiden Seiten binden, was zu höchster Sensitivität führt.
2. Was ist die Funktion des enzymgekoppelten Antikörpers?
✅ Erklärung: Der enzymgekoppelte Antikörper katalysiert die Umsetzung des Substrats, wodurch die messbare Farbreaktion entsteht.
3. Welche Aussage trifft auf den kompetitiven ELISA zu?
✅ Erklärung: Im kompetitiven ELISA konkurrieren Probe-Antigen und Standard-Antigen um begrenzte Antikörper-Bindungsstellen. Die Farbintensität ist invers proportional zur Antigenmenge in der Probe.
📖 Quellenangaben
ELISA-Test – einfach erklärt und Methode
educational_platform
Gute ELISA Praxis – Praxisleitfaden
technical_manual
ELISA Verfahren – Ablauf, Vorteile, Anwendung
educational_platform
Enzyme-linked Immunosorbent Assay (Wikipedia)
encyclopedia
GPCR-AAk – Bedeutung und ELISA-Methodenvergleich
clinical_publication
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